pcr反应体系如何建立?我做的是基因组的pcr,想扩增其中一个基因的一段,我设计的引物 上游 GCGTCGACTACAGCCTGTTTCAGCACTT 其中tm值是60.3 G和C的含量是 53.6下游 GCCTTAAGCACCCATTGCACATTCCA 其中tm值是58.3 G和C的

来源:学生作业学帮网 编辑:学帮网 时间:2024/05/30 01:23:38

pcr反应体系如何建立?
我做的是基因组的pcr,想扩增其中一个基因的一段,我设计的引物
上游 GCGTCGACTACAGCCTGTTTCAGCACTT 其中tm值是60.3 G和C的含量是 53.6
下游 GCCTTAAGCACCCATTGCACATTCCA 其中tm值是58.3 G和C的含量是 50.0
这个反应体系怎么设定?

从两条引物Tm看,退火温度大致在52~57℃左右.在这个范围内做下温度梯度.标准PCR体系就可以.
ps:引物有些偏长.

标准的PCR反应体系:
10×扩增缓冲液 10ul
4种dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10~100pmol
模板DNA 0.1~2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加双或三蒸水至 100ul

pcr反应体系如何建立?我做的是基因组的pcr,想扩增其中一个基因的一段,我设计的引物 上游 GCGTCGACTACAGCCTGTTTCAGCACTT 其中tm值是60.3 G和C的含量是 53.6下游 GCCTTAAGCACCCATTGCACATTCCA 其中tm值是58.3 G和C的 pcr技术的反应体系? PCR技术的反应体系要如何确定试验的反应体系要如何确定?我设定了一个反应体系,但是监测不到结果, PCR产物的电泳条带不够亮,为何?如何优化PCR反应体系我用的25微升的反应体系 PCR反应体系中,各试剂加样量是如何确定的? 实时荧光定量PCR后反应体系出现蒸发,用的是ABI 7500我做实时荧光定量PCR,有两个问题要解决:1.PCR之后发现反应体系减少了,可能是因为蒸发了,但是我在PCR之前使劲盖紧盖子了,为什么还会减少. pcr反应体系如何选择 PCR反应体系的主要成分包括什么? 人基因组DNA模板,PCR时条件怎么设置?我需要做重叠PCCR模板是基因组DNA,但没有这方面的经验,需要同道人士帮忙, RT-PCR 中 反转之后 PCR部分 DNA 的用量我用2ug RNA 25ul体系做完反转后 pcr部分用TAKARA的TAq酶 参考是50ul体系:给的模板用量参考是:人基因组DNA 0.1-1ug ,大肠杆菌的10-100ng ,入DNA 0.5-5ng,质粒DNA 0.1-10ng 植物基因组DNA,PCR没有条带这是我提的植物基因组DNA ,PCR没有条带,帮我看看基因组提的有没有问题,怎么才PCR能出来呢 真菌能做菌落pcr吗?请问,对分离出的真菌进行鉴定,能用菌落pcr吗?如何可以通用引物是什么?还有反应体系如何设定,请知道的前辈告知~ 高中历史如何建立大的知识体系 PCR的反应体系要具有什么条件? 关于细菌基因组PCR的问题向做过细菌PCR的请教:体系一般都是多少,退火温度呢我们做过退火温度有48度、43度、56度,引物是通用引物1492R和27F,模板和引物都没问题,是不是引物和模板不匹配,10 25ul的PCR体系中,含有20ug/ml的蛋白酶K,对细菌基因组DNA的PCR反应有影响吗?纯化后的蛋白酶K没有DNA酶活性,但它会消化PCR体系中的Taq酶吗?不怕假阳性。就怕假阴性 新手出道!如何将100uL的标准PCR反应体系改为20uLPCR反应体系?是各成分含量缩小五倍吗?100uL的标准PCR反应体系10×扩增缓冲液 10u,4种dNTP混合物 各200umol/L,引物各10~100pmol,模板DNA 0.2ug,Taq DNA聚合酶2 设计一个典型的PCR扩增程序和PCR反应体系.