请问用分光光度计测定(丙酮酸脱羧酶,乙醇脱氢酶,乳酸脱氢酶)时,需做标准曲线吗?请问用分光光度计测定(丙酮酸脱羧酶,乙醇脱氢酶,乳酸脱氢酶)以及叶绿素含量时,需做标准曲线吗?具
来源:学生作业学帮网 编辑:学帮网 时间:2024/05/31 00:10:27
请问用分光光度计测定(丙酮酸脱羧酶,乙醇脱氢酶,乳酸脱氢酶)时,需做标准曲线吗?
请问用分光光度计测定(丙酮酸脱羧酶,乙醇脱氢酶,乳酸脱氢酶)以及叶绿素含量时,需做标准曲线吗?具体的方法和计算公式是什么?
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(1)确定最大吸收波长:如果前三个物质都有紫外吸收的话,可以用各自的标准品配成一定浓度的标准溶液,先做200-400nm间的光谱扫描(没有颜色就不必做400-800nm扫描了).确定各自的最大吸收波长,在后面的定量测定时就在该波长下测定A.叶绿素的最大吸收波长可以查资料,在可见和紫外光区都有吸收(也可以照前三个物质做光谱扫描确定).
(2)确定各自的线性范围:取每一种物质的标准品配成浓度不等的一系列标准溶液(浓度范围较宽些,浓度点多一些),测定A值,然后用Excel或Origin作图,根据图像可以判断是否有线性,线性的浓度范围是多少.这是后续定量测量时的浓度控制范围.
(3)测定:按线性范围的要求配制5-8个浓度不等的标准溶液(最好成等差数列),同时配制试样溶液.测定它们的吸光度值,用Excel或Origin进行标准溶液浓度C与A的线性回归处理,得回归方程.将试样的A代入方程,可算得浓度.后面的处理你知道的.
如果几个都紫外吸收,吸收峰又部分重迭的情况,就必须用多波长测定,列方程联合求解的方法来测定(须预先测定各自在不同波长下的摩尔吸光系数值),单个测量是不行的.
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