双酶切质粒后电泳 双酶切质粒pgl 6.24(5882bp)无共同buffer kPN I 2.5小时 bgl II 3.5小时 之后电泳 为什么出来1万多的带?跑的比原来质粒还有10000bp的marker还慢……怎么回事啊……求高人指点
来源:学生作业学帮网 编辑:学帮网 时间:2024/06/06 00:20:38
双酶切质粒后电泳
双酶切质粒pgl 6.24(5882bp)无共同buffer kPN I 2.5小时 bgl II 3.5小时 之后电泳 为什么出来1万多的带?跑的比原来质粒还有10000bp的marker还慢……怎么回事啊……求高人指点
很显然是质粒发生了自连啦.切开的2个质粒连起来了,因此相当于2个质粒的大小.你需采用磷酸化避免自连发生.
双拷贝质粒,
请首先检查酶切前空载体的大小。最好先在KpnI单切以后,BglII二次酶切前,先检测一下,确认质粒的实际大小;确认无误了再进行BglII二次酶切。分段进行验证排查。
单纯的酶切后没有连接酶时,能引发自连的说法,理论上也许有;不过从我的7,8年的实验经历中,从来没有听说过谁真的出现过,更是从来没有见过。
从我以往的经历出发,最可能出现的问题就是使用了错误的质粒,或者质粒中有所不知道的...
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请首先检查酶切前空载体的大小。最好先在KpnI单切以后,BglII二次酶切前,先检测一下,确认质粒的实际大小;确认无误了再进行BglII二次酶切。分段进行验证排查。
单纯的酶切后没有连接酶时,能引发自连的说法,理论上也许有;不过从我的7,8年的实验经历中,从来没有听说过谁真的出现过,更是从来没有见过。
从我以往的经历出发,最可能出现的问题就是使用了错误的质粒,或者质粒中有所不知道的外源序列。一般情况下我会依照质粒图谱,对质粒进行酶切或者PCR确认。甚至是抽质粒时出现的基因组碎片污染都有可能。
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双酶切质粒后电泳 双酶切质粒pgl 6.24(5882bp)无共同buffer kPN I 2.5小时 bgl II 3.5小时 之后电泳 为什么出来1万多的带?跑的比原来质粒还有10000bp的marker还慢……怎么回事啊……求高人指点
质粒PCR后电泳出现 很多条带 怎么回事啊?
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重组质粒后为什么还需要双酶切、PCR鉴定并测序分析
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