为什么我的RT-PCR内参跑不出来.目的条带到是跑出来了

为什么我的RT-PCR内参跑不出来.目的条带到是跑出来了 RT PCR为何都要跑电泳,在PCR的时候为何要加内参?是为了判断是否是PCR过程中出现问题?内参跑不出来而cDNA能跑出来是怎么回事,相反又是怎么回事? 我做的RT-PCR怎么样让内参一致?刚入门 老板让做内参的条件 反复做也没有要P出来的目的条带 我的退火温度是55 可以的 但是用这个条件去P 其他的样就P不出来 应该怎么办? RNA跑胶多长时间才能把28S,18S和5S分开,我跑了大概30分钟,出来的是一条很亮的带,这样的RNA做RT-PCR内参能出结果,但是目的基因表达不出来,是因为RNA污染或降解吗,提取过程中我已经很注意了,以 PCR 内参 跑胶我跑半定量PCR的时候,内参出来的亮度不一致,有的 泳道很亮,有的暗一些,那我这张图还可以用吗,因为有人说内参的亮度应该保持一致?不是只要比目的基因和内参的灰度值来比较 pcr产物 跑胶及数据处理 1.同一个样本的目的和内参可以在同一块胶的不同上样孔里跑,这样出来的条带可以做灰度比值分析吧,但是,如果我目的和内参 在两块不同的胶上 并且两块胶 拍照时候 用RT-PCR检测目的基因的表达情况,需将内参基因的条带亮度调成一致.用RT-PCR检测目的基因的表达情况,需将内参基因的条带亮度调成一致,这个很费事,我一般是配50ul的内参基因pcr反应体系,分几 RT PCR只跑出内参的条带,没有目的基因,原因有哪些? 用RT-PCR检测目的基因表达差异,需将内参基因的电泳条带亮度调成一致.用RT-PCR检测目的基因表达差异,需将内参基因的电泳条带亮度调成一致,这个很费事,我一般是在一个管里配50ul的内参基因 做RT-PCR时,上下引物退火温度一定要一样吗?内参条带很亮,为什么没有目的基因? 反转录RT-PCR的内参如何选择? RT-PCR电泳照片做RT-PCR跑电泳时,只在一个孔中单独加了内参,其他孔中分别加了marker和目的基因,这样的照片发表文章时行吗?看其他人的电泳照片内参的亮度都是一样的,我就只单独加了一个内 半定量rt pcr内参和目的基因的引物加的量相同吗,能否放在同一管中跑PCR 第一次做荧光定量PCR,内参基因能够跑出来,而且溶解曲线也比较好,但是目的基因完全跑不出来目的基因的溶解曲线基本没有,模板浓度已经从10倍稀释,到倍稀释,到2倍稀释了.目的基因还是跑不 请问,GAPDH作为RT-PCR内参的原理是什么呀?我知道为什用它做内参了,就是不清楚怎么用它, 怎样摸索PCR条件我做的 RT-PCR 以内参为对照进行条件摸索 但是就是P出不来条带 请问荧光定量PCR进行相对定量时,若是目的基因和内参基因扩增效率不一致,为什么会导致结果的不准确?那么怎么平衡扩增效率呢? RT-PCR内参电泳跑不出来β-actin,退火温度57℃,45s扩增完之后DNA浓度大概600微末每毫升,跑完胶发现marker清晰,其他一片空白.实验室也没个明白人指点,让我做完实验赶紧回家过年……