PCR与DNA分子克隆我不是很明白,为什么有了PCR技术还要用大肠杆菌做DNA扩增?直接跑PCR不是更快吗?
来源:学生作业学帮网 编辑:学帮网 时间:2024/05/29 10:22:44
PCR与DNA分子克隆
我不是很明白,为什么有了PCR技术还要用大肠杆菌做DNA扩增?直接跑PCR不是更快吗?
这个有多方面的原理:
一个:PCR有错误,虽然这个错误率很低,普通的酶大概在千分之一,而高保真的在百万分之一,但毕竟有.
二个:基因保存的问题:PCR产物当然也可以保存,但保存时间长了会不会出问题?能保存几年?克隆进质粒就不一样了,这个基本可以保存很久,哪一天想要这个基因,拿出来摇一小瓶就可以了.
三个:单克隆性,PCR片断可能有长有短(还有突变),而质粒就不一样了,可以挑单克隆,测序正确后就认为这是我们想要的基因.
四个:做基因表达时连接方便.如果PCR产品上没有酶切位点,克隆载体上有,切下来可以连到表达载体上.
象有些人做基因库时,都是克隆到载体上,肯定是这样有很多优点的.
转化质粒不止是为了扩增,
如果是表达宿主,可以重组表达蛋白质
或者质粒改变或增加了宿主的抗性
就测序的话,sanger法前几十个bp的信号不是很稳定,所以在质粒载体上,可以用通用引物承担这部分弱信号
如果是混合模板比如微生物群落,PCR产物就是混合物,需要做文库挑单克隆...
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转化质粒不止是为了扩增,
如果是表达宿主,可以重组表达蛋白质
或者质粒改变或增加了宿主的抗性
就测序的话,sanger法前几十个bp的信号不是很稳定,所以在质粒载体上,可以用通用引物承担这部分弱信号
如果是混合模板比如微生物群落,PCR产物就是混合物,需要做文库挑单克隆
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PCR与DNA分子克隆我不是很明白,为什么有了PCR技术还要用大肠杆菌做DNA扩增?直接跑PCR不是更快吗?
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