PCR扩增目的基因以后,怎么用琼脂糖电泳回收及纯化呢?希望高手指教!

PCR扩增目的基因以后,怎么用琼脂糖电泳回收及纯化呢?希望高手指教!

一般购买纯化试剂盒进行纯化.以Takara公司的试剂盒为例：
1.使用TAE缓冲液或TBE缓冲液制作琼脂糖凝胶,然后对目的DNA进行琼脂糖凝胶电泳.
2.在紫外灯下切出含有目的DNA的琼脂糖凝胶,用纸巾吸尽凝胶表面的液体.此时应注意尽量切除不含目的DNA部分的凝胶,尽量减小凝胶体积,提高DNA回收率.
注）切胶时请注意不要将DNA长时间暴露于紫外灯下,以防止DNA损伤.
3.切碎胶块.胶块切碎后可以加快胶块融化时间,提高DNA的回收率.
4.称量胶块重量,计算胶块体积.计算胶块体积时,以1 mg=1 μl进行计算.
5.向胶块中加入胶块融化液DR-I Buffer,DR-I Buffer的加量如下表：
凝胶浓度
DR-I Buffer使用量
1.0％
3个凝胶体积量
1.0％～1.5％
4个凝胶体积量
1.5％～2.0％
5个凝胶体积量
6.均匀混合后75℃加热融化胶块（低熔点琼脂糖凝胶只需在45℃加热）.此时应间断振荡混合,使胶块充分融化（约6～10分钟）.
注）胶块一定要充分融化,否则将会严重影响DNA的回收率.
7.向上述胶块融化液中加入DR-I Buffer量的1/2体积量的DR-II Buffer,均匀混合.当分离小于400 bp的DNA片段时,应在此溶液中再加入终浓度为20%的异丙醇.
8.将试剂盒中的Spin Column安置于Collection Tube上.
9.将上述操作7的溶液转移至Spin Column中,12,000 rpm离心1分钟,弃滤液.
注）如将滤液再加入Spin Column中离心一次,可以提高DNA的回收率.
10.将500 μl的Rinse A加入Spin Column中,12,000 rpm离心30秒钟,弃滤液.
11.将700 μl的Rinse B加入Spin Column中,12,000 rpm离心30秒钟,弃滤液.
注）请确认Rinse B中已经加入了指定体积的100%乙醇.
12.重复操作步骤11.
13.将Spin Column安置于Collection Tube上,12,000 rpm离心1分钟.
14.将Spin Column安置于新的1.5 ml的离心管上,在Spin Column膜的中央处加入25 μl的灭菌蒸馏水或Elution Buffer,室温静置1分钟.
注）把灭菌蒸馏水或Elution Buffer加热至60℃使用时有利于提高洗脱效率.
15.12,000 rpm离心1分钟洗脱DNA.

可以用回收试剂盒。举例如下：
DNA的回收使用AXYGEN公司AxyPrep DNA凝胶回收试剂盒，回收步骤如下：
1、 在紫外灯下切下含有目的DNA的琼脂糖凝胶，用纸巾吸尽凝胶表面液体并切碎。计算凝胶重量（提前记录1.5 ml离心管重量），该重量作为一个凝胶体积（如100 mg=100 μl体积）；
2、 加入3个凝胶体积的Buffer DE-A，混合均匀后于75 ℃加热...

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可以用回收试剂盒。举例如下：
DNA的回收使用AXYGEN公司AxyPrep DNA凝胶回收试剂盒，回收步骤如下：
1、 在紫外灯下切下含有目的DNA的琼脂糖凝胶，用纸巾吸尽凝胶表面液体并切碎。计算凝胶重量（提前记录1.5 ml离心管重量），该重量作为一个凝胶体积（如100 mg=100 μl体积）；
2、 加入3个凝胶体积的Buffer DE-A，混合均匀后于75 ℃加热，,间断混合（每2-3 min），直至凝胶块完全融化（约6-8 min）；
3、 加0.5个Buffer DE-B，混合均匀；
4、 吸取步骤3中混合液，转移到DNA制备管（置于2 ml( 试剂盒内提供)离心管）中，12,000×g离心1 min，弃滤液；
5、 将制备管置回2 ml离心管，加500 μlBuffer W1，12,000×g离心30 s，弃滤液；
6、 将制备管置回2 ml离心管，加500 μlBuffer W2，12,000×g离心30 s，弃滤液，用同样的方法再用700 μl Buffer W2洗涤一次12,000×g离心1 min；
7、 将制备管置回2 ml离心管，12,000×g离心1 min；
8、 将制备管置于洁净的1.5 ml离心管（试剂盒内提供）中，在制备膜中央加25-30 μlEluent，室温静置1 min，12,000×g离心1 min洗脱DNA。
如果片段较大，如几千kb以上建议用promega公司的回收试剂盒这样效果较好。
具体的步骤什么的回收试剂盒里均有说明书。

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一般都是用试剂盒的，里面有说明书，你一看就明白了，

跑胶后用试剂盒回收就可以了啊，一般用杭州的axycen试剂盒