PCR Buffer 的作用是什么?急用,

来源：学生作业学帮网编辑：学帮网时间：2024/05/06 07:57:01

PCR反应的缓冲液的目的是给Taq DNA聚合酶提供一个最适酶催反应条件.目前最为常用的缓冲体系为10-50mmol/L Tris-HCl (pH8.3-8.8,20℃) Tris是一种双极性离子缓冲液,20℃时其pKa值为8.3,△pKa值为-0.021/℃.因此,20mmol/l Tris-HCl(pH8.3,20℃)在实际PCR中,pH变化于6.8-7.8之间.改变反应液的缓冲能力,如将Tris浓度加大到50mmol/L,pH8.9,有时会增加产量.
反应混合液中50mmol/L以内的KCl,pH8.9有利于引物的退火,50mmol/l NaCl或50 mmol/L以上的KCl则抑制Taq DNA聚合酶的活性.有些反应液中以NH+4代K+,其浓度为16.6mmol/L.反应中加入小牛血清白蛋白（100μg/ml）或明胶（0.01%）或Tween 20（0.05% ～0.1%）有助于酶的稳定,反应中加入5mmol/l 的二硫苏糖醇（DTT）也有类似作用,尤其在扩增长片段（此时延伸时间长）时,加入这些酶保护剂对PCR反应是有利的.

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A液：变性液裂解细胞或细菌等等，使所有DNA变性
B液：醋酸钠溶液中和A液至中性，
C液：酚／氯仿／异戊醇混合液（50：49：1）抽取RNA
D液：异丙醇
E液：75％乙醇都是沉淀提取的RNA
F液：DEPC处理的灭菌去离子水无RNA酶的水，防止RNA降解
G液：RNA酶抑制剂防止RNA降解
H液：反转录反应液使反转录酶具有最大活性的优化缓冲液
I液：反转录酶使RNA翻转录成DNA
J液：PCR反应液使Taq酶具有最大活性的优化缓冲液
K液：Taq DNA聚合酶(0.5u／µl) 扩增你所要的DNA片段
L液：矿物油保持PCR反应管上层不会散热
M液：50倍TAE电泳缓冲液电泳（鉴定扩增dna片段）所需的缓冲液。
N液：溴化乙锭溶液嵌入DNA双链中的荧光分子，可在紫外灯下显桔红色。
0液：上样缓冲液 DNA电泳时所需的处理样品的缓冲液，兼有指示电泳进行状态的作用。

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