是否存在DNA环化酶,两端是酶切的两个头我用一种限制性内切酶切了基因组DNA,现在想让切下了的各个片段自身环化.如果就用连接酶,怕连到别的片段上去了,我就想让单个片段自己环化连接.有
来源:学生作业学帮网 编辑:学帮网 时间:2024/05/29 05:09:05
是否存在DNA环化酶,两端是酶切的两个头
我用一种限制性内切酶切了基因组DNA,现在想让切下了的各个片段自身环化.
如果就用连接酶,怕连到别的片段上去了,我就想让单个片段自己环化连接.有这种酶吗?或者有什么办法
不能采用电泳分离方法,片段太多,工作量大的惊人,电泳方法我早就想过了,没有实际价值,我就是要在许多不同片段混合的情况下,使单分子DNA片段自身环化
1 不存在这种环化酶.拓扑异构酶虽然能催化同链DNA缺口的连接,但是需要特定序列.
2 其实你可以直接用连接酶进行连接.因为片段自身环化属于分子内反应,符合化学上一级反应动力方程,而形成二体、三体则是分子间反应,符合二级反应动力学方程.理论上来说,自身环化效率要比分子间连接并环化的效率高得多.但是要控制反应条件.比如用浓度较低的体系进行连接.连接之后,用DNA外切酶切除线性DNA,留下环化的DNA即可.
你可以先电泳 分离收集得到相同的DNA片断。
然后将相同的片断,用连接酶连接, 就有可能得到自身环化的DNA了,也可能得到2连体,甚至三联体等。
连接后再电泳,收集片断最小的那个就应该是单环化的。
只要DNA片段两端都是平末端,而且序列正确可以连接上的话,你就用连接酶连接就行了,当然,这个会存在还没连上的DNA片段
是否存在DNA环化酶,两端是酶切的两个头我用一种限制性内切酶切了基因组DNA,现在想让切下了的各个片段自身环化.如果就用连接酶,怕连到别的片段上去了,我就想让单个片段自己环化连接.有
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