为什么用Folin酚法和考马斯亮蓝法测蛋白质含量,结果会有很大差异实验是用牛血清蛋白制作标准曲线,测定白菜中的蛋白质含量,用Folin酚法和考马斯亮蓝法分别测,结果会有很大差异(Folin酚法
为什么用Folin酚法和考马斯亮蓝法测蛋白质含量,结果会有很大差异
实验是用牛血清蛋白制作标准曲线,测定白菜中的蛋白质含量,用Folin酚法和考马斯亮蓝法分别测,结果会有很大差异(Folin酚法是考马斯法的大概两三倍).大家都是这个结果,所应应该不是操作失误.那么从原理上分析可能是什么原因呢?
大概与样品中的干扰物质有关.
干扰Folin酚法的物质有:酚类、柠檬酸、硫酸铵、Tris缓冲液、甘氨酸、糖类、甘油等.
干扰考马斯法的:主要是去污剂,如 Triton X-100、十二烷基硫酸钠(SDS)和0.1N的NaOH.(如同0.1N的酸干扰Lowary法一样).
植物样品经常会含有酚类、有机酸等,提取蛋白可能用到Tris,这是常见的干扰物.检查一下操作程序吧.
测定浓度时用buffer作空白对照了吧?
测定蛋白质含量,有多种方法,其中考马斯亮蓝法和Folin酚法是灵敏度最高的两种方法,各有优缺点:考马斯亮蓝法干扰物质少,颜色稳定, 颜色深浅随不同蛋白质变化,标准曲线有轻微的非线性;Folin酚法操作要严格计时,颜色深浅随不同蛋白质变化,标准曲线不是严格的直线形式,且专一性差。因此,各方法并不能在任何条件下适用于任何形式的蛋白质。
Folin酚法干扰物质较多,不适于硫柳汞做防腐剂的样品和核...
全部展开
测定蛋白质含量,有多种方法,其中考马斯亮蓝法和Folin酚法是灵敏度最高的两种方法,各有优缺点:考马斯亮蓝法干扰物质少,颜色稳定, 颜色深浅随不同蛋白质变化,标准曲线有轻微的非线性;Folin酚法操作要严格计时,颜色深浅随不同蛋白质变化,标准曲线不是严格的直线形式,且专一性差。因此,各方法并不能在任何条件下适用于任何形式的蛋白质。
Folin酚法干扰物质较多,不适于硫柳汞做防腐剂的样品和核酸含量较高的样品检测;蛋白糖化物对考马斯亮蓝法存在干扰,因此,应用考马斯亮蓝法测定含糖基蛋白的制品时需进一步改进。
收起